1、病毒純化通過超速離心過濾等方法對病毒進行純化，以提高病毒滴度病毒滴度測定使用合適的方法如熒光素酶報告基因檢測測定病毒的滴度，以確保病毒的質(zhì)量注具體包裝步驟可能因?qū)嶒灄l件和試劑盒的不同而有所差異，建議參考具體試劑盒的說明書進行操作以上內(nèi)容詳細闡述了慢病毒包裝的原理；質(zhì)粒純化是大多數(shù)分子生物學實驗室的常用技術(shù)雖然標準的堿裂解方法已經(jīng)很成熟，但仍然可能出現(xiàn)令人驚訝的問題本指南列出了；1986年，QIAGEN推出首款質(zhì)粒純化試劑盒，提取技術(shù)上的革新將原本2天才能完成的質(zhì)粒純化縮短到2小時，從此開啟了用試劑盒完成；1986年，全球第一款質(zhì)粒純化試劑盒在德國誕生了！這可是一次了不起的的技術(shù)革新，原先要花兩天才能完成的質(zhì)粒純化，我真的沒夸。

2、提取220ug質(zhì)粒DNA介紹該試劑盒將經(jīng)典的堿裂解法和磁珠法純化方式結(jié)合，適合從96個115ml培養(yǎng)過夜的菌液中純化220ug高純度；對于單點突變，Stratagene公司的QuikChangeSiteDirectedMutagenesisKit是不錯的選擇通過巧妙設(shè)計，將質(zhì)粒定點突變技術(shù)變得簡單有效準備突變的質(zhì)粒必須是從常規(guī)大腸桿菌中經(jīng)純化試劑盒Miniprep或者氯化銫純化抽提的質(zhì)粒設(shè)計一對包含突變位點的引物正反向和模版質(zhì)粒退火后用PfuTurbo聚合酶“循環(huán)延伸”；是否需要純化，還需進一步檢測才能確定 1測濃度和純度，是否達標 2跑電泳看條帶是否與測的數(shù)據(jù)相互印證 如果上述兩點滿足，就不需要純化，否則需要進一步純化不過根據(jù)經(jīng)驗，一般都不需要，我們實驗室用的是GNT系列的試劑盒，提取結(jié)果就直接進入下游實驗了，效果挺穩(wěn)定 質(zhì)粒是真核細胞細胞核外或原核。

3、樓上說的是一方面PCR產(chǎn)物測序也是可以的，可以送粗樣，也就是不純化的，也可以送純化好的但很多公司測的不是很好，所以一般建議轉(zhuǎn)到克隆載體中保存了送菌液或質(zhì)粒測序PCR產(chǎn)物純化是去除多余的dNTP和引物二聚體用純化好的片段連接轉(zhuǎn)化可以降低背景，提高轉(zhuǎn)化效率通常轉(zhuǎn)化后我們用幾種方法來確認；一個是從細菌中提取，一個是把提取出來的DNA純化區(qū)別很明顯啊這兩者之間共通之處，我覺得是都是要把DNA沉淀再溶解，這樣達到從細菌中分離DNA和純化DNA的效果一般；從具體操作方法分可以分為堿裂解法煮沸法牙簽法等在氫氧化鈉pH120126堿性環(huán)境和去污劑SDS的作用下，細菌蛋白質(zhì)變性，細胞破裂，細菌染色體DNA變性，雙鏈DNA氫鍵斷裂，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)遭破壞而發(fā)生變形但由于質(zhì)粒DNA相對分子質(zhì)量較小，公價閉環(huán)的DNA雖然變性但仍處于拓撲纏繞狀態(tài)，呈環(huán)狀超；傳統(tǒng)商業(yè)化的質(zhì)粒抽提試劑盒難以滿足大規(guī)模制備基因載體的需求，主要是因為1產(chǎn)量低，至多能提供數(shù)毫克級的質(zhì)粒2產(chǎn)品質(zhì)。

4、無內(nèi)毒素質(zhì)粒純化試劑盒采用新型專有陰離子交換樹脂，以現(xiàn)行標準方案約一半的時間分離高級轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒 DNA，獲得內(nèi)毒素水平低；一慢病毒載體構(gòu)建與質(zhì)粒純化 質(zhì)粒選擇根據(jù)實驗需求選擇目的質(zhì)粒，如CRISPR系統(tǒng)的IentiCRISPR v2shRNA敲低系統(tǒng)的pLKO1TRC或過表達系統(tǒng)的pCDHCMVMCSEF1Puro同時準備病毒包裝輔助質(zhì)粒psPAX2和pMD2G質(zhì)粒擴增與純化將上述質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至DH5α感受態(tài)細胞中進行擴增使用去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試。

5、針對PCR產(chǎn)物的純化試劑盒通常適用于小片段DNA如果PCR產(chǎn)物的片段大小在這個范圍內(nèi)，使用純化試劑盒是合適的對于質(zhì)粒等較大片段的DNA，雖然純化回收效率可能會有所下降，但只要操作得當，仍然可以獲得足夠量的純化產(chǎn)物用于轉(zhuǎn)化實驗綜上所述，在轉(zhuǎn)化大腸桿菌之前對PCR產(chǎn)物進行純化通常是必要的，且不會對。