2M的醋酸是為了中和NaOH基因組DNA一旦發(fā)生斷裂，只要是50100 kb大小的片斷，就沒(méi)有辦法再被 PDS共沉淀了，所以堿處理的時(shí)間要短，而且不得激烈振蕩，不然最后得到的質(zhì)粒上總會(huì)有大量的基因組DNA混入，瓊脂糖電泳可以觀察到一條濃濃的總DNA條帶75%酒精主要是為了清洗鹽份和抑制Dnase同時(shí)溶液III的。

是細(xì)胞裂解液吧，確定全揮發(fā)了可以再加；這個(gè)和50100 runs一個(gè)意思，就是按照試劑說(shuō)明里面的要求，可以用50次但是如果你做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，按倍數(shù)減少體積，就可以多用幾次轉(zhuǎn)自小木蟲(chóng)；質(zhì)粒大提取是指對(duì)從細(xì)菌或酵母等生物中提取出高質(zhì)量大量的質(zhì)粒DNA的過(guò)程以下是關(guān)于質(zhì)粒大提取的詳細(xì)解釋1 目的 質(zhì)粒大提取的主要目的是獲得足夠的DNA量，以便進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作，如分子克隆基因表達(dá)蛋白質(zhì)生產(chǎn)等2 技術(shù)方法 常用的質(zhì)粒大提取技術(shù)包括鹽提取法堿解法商業(yè)試劑盒法等；若碳水化合物的量很大，在CsCl溴化乙錠梯度離心中會(huì)使超螺旋質(zhì)粒DNA帶變得模糊不清大腸桿菌菌株HBl01及其衍生菌株其中包括TGl能產(chǎn)生大量的碳水化合物，不適于用煮沸法裂解質(zhì)粒小提試劑盒 用于大腸桿菌中質(zhì)粒DNA的小量提取，它結(jié)合了優(yōu)化的堿裂解法，以及方便快捷的硅膜離心技術(shù)，具有高效，快捷的；實(shí)驗(yàn)室一直都是用日常型質(zhì)粒抽提試劑盒，轉(zhuǎn)染細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題我覺(jué)得只要是注意以下2點(diǎn)就可以了1，注意大腸桿菌Escherichia coli本身的污染，收集菌體沉淀時(shí)防止菌液散落，經(jīng)常用75%的乙醇擦拭手套2，最后洗脫時(shí)最好使用無(wú)內(nèi)毒素的水，我們是用注射用水的無(wú)論是小提還是大提我們都是用的日常型的。

但由于質(zhì)粒DNA相對(duì)分子質(zhì)量較小，公價(jià)閉環(huán)的DNA雖然變性但仍處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)，呈環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)，即使在高堿性pH條件下，兩條互補(bǔ)鏈也不會(huì)完全分離將pH調(diào)至中性并有高鹽存在的條件下，變性質(zhì)粒DNA又恢復(fù)到原來(lái)的構(gòu)型，而大部分染色體DNA和蛋白質(zhì)難以復(fù)性，與細(xì)胞碎片蛋白質(zhì)SDS等形成不溶性復(fù)合物；各公司的質(zhì)粒提取試劑盒大同小異，你這個(gè)說(shuō)明書(shū)可能是寶生物的試劑盒用試劑盒提，準(zhǔn)備工作都比較簡(jiǎn)單1，搖菌2，準(zhǔn)備ddH2O，無(wú)菌槍頭和離心管3，檢查溶液1是否加了Rnase，以及wash buffer是否加了無(wú)水乙醇3，現(xiàn)在天氣冷，檢查buffer是否有沉淀，有sds的buffer可能有會(huì)有析出，提前開(kāi)水浴鍋。

不過(guò)加2ml也沒(méi)有太大影響，只要保證菌沒(méi)有長(zhǎng)老就行，氨芐在培養(yǎng)基中的終濃度一般是100ugml，加入你的氨芐貯存液配置的是100mgml，那么100ml培養(yǎng)基中需要加100ul，氨芐在培養(yǎng)基中一般十幾個(gè)小時(shí)會(huì)失效，注意搖菌時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，否則易污染雜菌，同時(shí)菌本省也容易長(zhǎng)的太老，不易提取質(zhì)粒是。